噬菌体透射电镜

**1.单噬菌体样本** 样本要求： 噬菌体浓缩液50-100ul悬液，纯度和浓度尽量高，建议滴度至少1×109或更高。 寄送要求 冰袋寄送（样本不可直接接触冰袋表面）。 **2.噬菌体吸附细菌负染电镜** 2.1 制备条件 1.条件允许的情况下，尽量做吸附曲线，确定最佳吸附时间，吸附率90%左右取样； 2.若不能做吸附曲线，推荐加入噬菌体后吸附30min左右取样，这个时间对大部分噬菌体-细菌组合适用，但不排除部分不适用的情况； 3.噬菌体细菌混合时采用MOI ≥ 10，如果噬菌体滴度够高，可以考虑用MOI100侵染细菌。 2.2 样本要求 每个样品准备两管，1管鲜样，1管固定： 1.低速离心收集细菌，建议800-1000rpm，3 min； 2.用不含明胶的SM buffer重悬，轻轻吹打重悬，轻轻吸取100-200ul至EP管中，4℃保存； 3.另外一管沿管壁缓慢加入2.5%戊二醛固定液或者4%多聚甲醛+2.5%戊二醛的混合固定液（不可吹散细菌），然后4℃保存； 4.务必标记清楚鲜样和固定管。确保细菌鲜样没有传染性，没有致病性。如果有传染或致病风险，请勿提供鲜样，仅寄送固定样品即可； 5.建议样品制备好后立即寄送，鲜样3-5天内完成电镜拍摄，固定样品一周之内完成电镜拍摄。4℃运输，用小盒子或者泡沫等包裹样品管，勿直接接触冰袋，避免样品被冻住。